文章摘要:目的利用Real-timeRT-PCR检测技术,对乙型脑炎病毒入侵细胞的内吞途径进行初步研究。方法将BHK细胞接种于96孔细胞培养板,选用氯丙嗪、制霉菌素和细胞松弛素D3种药物分别处理细胞,以分别阻滞网格蛋白介导内吞途径、细胞膜穴样内陷途径和巨胞饮途径,然后进行JEV感染实验。将样品处理收集后,抽提总RNA,并反转录成c DNA。通过Real-time RT-PCR方法测定感染后1 h、12 h、24 h细胞内的病毒拷贝数。读取样品c DNA模板的Ct值,然后通过标准曲线公式Y=-0.3007X+10.53计算出模板初始拷贝数。换算为样品模板拷贝数的平均对数值（log10 copies）后,所得数据用软件SPSS 13.0进行统计学分析。结果与仅实施感染实验、未进行药物处理的对照组比较,3种药物处理组的细胞内病毒拷贝数在感染后各时相点均呈现不同程度的下降,在感染1 h、12 h和24 h后,氯丙嗪处理组细胞内病毒拷贝数分别下降了59.58%,53.34%和61.35%;细胞松弛素D组细胞内病毒拷贝数分别下降了23.59%,30.77%和30.14%;制霉菌素组细胞内病毒拷贝数分别下降了35.56%,34.40%和34.40%,氯丙嗪+制霉素处理组分别下降了48.50%,68.56%,67.11%;氯丙嗪+细胞松弛D处理组分别下降了58.10%,60.30%,75.97%;制霉素+细胞松弛素D处理组分别下降了24.27%,51.20%,49.42%;氯丙嗪+制霉素+细胞松弛素D处理组分别下降了68.27%,73.00%,79.19%。结果显示:当3种药物单独作用时氯丙嗪处理的细胞测得病毒数量相比对照组下降最多;当两种药物组合作用时,含有氯丙嗪的药物组病毒数量下降最多;当三种药物组合作用时,测得病毒数量最少,对病毒入侵抑制效果最强。结论乙型脑炎病毒主要利用网格蛋白介导内吞途径进入BHK-21细胞,这与同属于黄病毒属的西尼罗病毒、登革热病毒进入宿主细胞的内吞方式一致。

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论文DOI:10.26914/c.cnkihy.2014.000497

论文分类号:R373