文章摘要:日本脑炎病毒（JEV）是一种重要的人兽共患传染病病原,我国流行的日本脑炎病毒基因型为基因Ⅰ型和基因Ⅲ型。本研究为建立一种简单、快捷的鉴别JEV基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的方法,通过对Genebank中登录的基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV核酸序列的比对分析,分别确定了基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV基因型特异性序列,分别设计合成了针对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的RT-PCR引物P1/P3和P2/P3,以JEV SA14-14-2和CZ1株的核酸提取液为模板,通过对反应体系及反应条件的优化,建立了一种可快速鉴别JEV基因Ⅰ型和Ⅲ型的复合RT-PCR方法,并进行了特异性试验、灵敏性试验和重复性试验,同时利用建立的方法对采自四川省部分地区的27份临床样品进行了JEV的检测及基因型的鉴定。结果显示,以设计合成的PCR引物进行复合RT-PCR扩增,基因Ⅰ型JEV可得到与预期相符的381 bp的特异性条带,基因Ⅲ型JEV可得到与预期相符的550 bp的特异性条带,基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV混合模板则同时出现381 bp和550 bp的2个特异性条带,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病毒的核酸扩增结果均为阴性,显示出较高的特异性;敏感性试验结果显示,该方法对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的最小检出量分别为2.0 pg和20 pg,敏感性很高;利用建立的复合RT-PCR方法对27份临床样品检测结果显示,共有7份样品为JEV阳性,其中5份为基因Ⅰ型,2份为基因Ⅲ型,基因型鉴定结果与核苷酸序列分析结果一致。结果表明,建立的复合RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、结果可靠、快速简便等特点,可用于JEV的检测及基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的鉴定。

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论文DOI:10.26914/c.cnkihy.2014.000502

论文分类号:R373